Author: Angelique CoutablePublisher:
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Book Description
Les protéines membranaires intégrales jouent un rôle essentiel dans le maintien de l'intégrité cellulaire (transports d'ions et de nutriments, transduction de signal, interaction cellule-cellule). Afin de les étudier, ces protéines doivent être produites in vitro. La production classique de ces protéines membranaires intégrales dans des microorganismes présente de nombreuses difficultés liées à leur structure complexe mais aussi à des problèmes de toxicité, empêchant la production de nombre d'entre elles. En outre, pour être produites efficacement, ces protéines ont besoin d'un environnement amphiphile. Dans cette thèse, afin de pallier à ces difficultés, nous avons d'une part utilisé un système d'expression protéique acellulaire, non affecté par la physiologie des cellules vivantes. En outre, nous avons choisi de les intégrer dans des bicouches lipidiques planes reconstituées artificiellement. Dans une première partie, nous avons mis au point l'intégration d'une protéine membranaire intégrale formant un pore, l'alpha hémolysine, dans une bicouche lipidique supportée. Certaines protéines nécessitant un espace plus important de part etd'autre de la membrane, nous avons, dans une seconde partie, développé une bicouche lipidique espacée et ancrée par fusion de liposomes sur des surfaces d'or. Nous démontrons qu'il est possible d'y incorporer des protéines membranaires de type Aquaporine Z sous certaines conditions. Dans une troisième partie, dédiée à la formation de membranes biomimétiques utilisant des molécules lipidiques provenant d'Escherichia coli, nous montrons que la modification de la composition membranaire ne semble pas avoir d'incidence sur l'incorporation de protéines. Enfin, dans une dernière partie, nous avons réalisé des premiers essais d'insertion de protéines membranaires, de type alpha hémolysine, dans des bicouches suspendues afin de montrer que ces protéines produites par le système d'expression acellulaire sont fonctionnelles.