Etude de l'influence de la mutarotase en solution lors du dosage du glucose par une électrode à pâte de carbone modifiée par l'enzyme GOD PDF Download

Author: Anita Rondeau
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Languages : fr
Pages : 82

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Author: Zsuzsa Iffiú-Soltész
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Languages : fr
Pages : 128

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L'obésité et le diabète sont de sérieux problèmes de santé dans les pays développés. Le développement de médicaments qui pourraient normaliser un métabolisme glucidique alteré est donc une grande nécessité actuelle. L'amine oxydase sensible au semicarbazide (SSAO) semble être une cible d’intérêt pour améliorer l’homéostasie glucidique. Cette enzyme oxyde les amines primaires. Elle est fortement exprimée dans le tissu adipeux blanc (WAT) et dans les vaisseaux. Sa forme circulante est un facteur indépendant des complications cardiovasculaires du diabète et de l'obésité. Cependant, l'administration des substrats exogènes de la SSAO réduit l'hyperglycémie des animaux diabétiques. Il a été montré que le peroxyde d'hydrogène formé pendant l'oxidation des amines par la SSAO tissulaire est responsable d'un tel effet. Pourtant, cette espèce reactive de l'oxygène, à forte dose, peut aussi contribuer aux complications de l'obesité et du diabète. Nous avons étudié l'influence des substrats de la SSAO sur certains paramètres de l'obésité et du diabète. Nous avons d'abord examiné l'influence de la masse du tissu adipeux blanc sur sa richesse en SSAO en la faisant varier expérimentalement (obésité et jeûne). Nous avons ensuite analysé les actions insulinomimétiques de la benzylamine (BzA), un substrat exogène de la SSAO, in vitro et in vivo. De plus, nous avons étudié l’effet de traitements à long terme par la BzA sur la tolérance au glucose et les éventuelles complications vasculaires. Enfin, nous avons testé des molécules nouvelles, substrats potentiels de la SSAO sur des adipocytes humains. L'activité de la SSAO augmente dans le WAT sous-cutané de souris obèses. L'injection de BzA améliore l'homéostasie glucidique des animaux diabétiques de type 1 et 2. L'injection chronique de BzA améliore la function endothéliale de rats diabétiques si elle est effectuée simultanément avec du vanadate. L'administration chronique de BzA par voie orale améliore aussi la tolérance au glucose dans trois modèles de souris résistantes à l'insuline dans des conditions où nous n’avons pas observé d'effets délétères du peroxyde d'hydrogène. De plus, la concentration des nitrites augmente dans l'aorte, indiquant qu'une meilleure biodisponibilité du NO a accompagné la réduction du glucose plasmatique. Ces résultats obtenus sur des rongeurs obèses et diabétiques ont confirmé l'action bénéfique de la BzA sur le métabolisme glucidique. En utilisant un système de criblage basé sur l'utilisation d'adipocytes humains, nous avons caractérisé quelques molécules plus efficaces que la BzA pour mimer les effets de l'insuline. L'ensemble de ce travail nous encourage à considérer les substrats de la SSAO comme de possibles médicaments antidiabétiques.

Author: PHILIPPE.. BACCHI
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Category :
Languages : fr
Pages : 157

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CE MEMOIRE PORTE SUR L'UTILISATION DE SOLUTIONS CONCENTREES DE NAFION (GELS HYDROPHOBES DE NAFION) POUR L'IMMOBILISATION DE LA GLUCOSE OXYDASE (GOD) A LA SURFACE D'ELECTRODES. DANS UN PREMIER TEMPS, L'OXYDASE EST CONTENUE AU SEIN D'UNE PATE DE CARBONE AQUEUSE, LE GEL DU IONOMERE REALISANT UN INTERFACE SELECTIF ENTRE SYSTEME ENZYMATIQUE IMMOBILISE ET MILIEU DE DOSAGE. CETTE SEPARATION DES DEUX INTERVENANTS EST IMPOSEE PAR LEUR INCOMPATIBILITE, LA CONFRONTATION DE LA GOD ET DE LA SOLUTION HYDROPHOBE DU POLYMERE CONDUISANT A UNE PERTE DES PROPRIETES CATALYTIQUES DE L'ENZYME. L'ETUDE DU COMPORTEMENT DE CE DISPOSITIF PERMET D'EN DEGAGER LES CARACTERISTIQUES ET DE METTRE EN EVIDENCES SES PRINCIPALES LIMITATIONS: MAUVAISE IMMOBILISATION DU MEDIATEUR (ESPECE ELECTROACTIVE CHARGEE DU TRANSPORT D'ELECTRONS ENTRE ENZYME ET ELECTRODE), INHIBITION DE LA REACTION D'OXYDATION DU GLUCOSE, MINIATURISATION POUSSEE IMPOSSIBLE. CE TRAVAIL EST COMPLETE PAR UNE ETUDE CINETIQUE, REALISEE AU MOYEN D'UNE ELECTRODE TOURNANTE, GRACE A LAQUELLE LA PERMEATION DU GLUCOSE AU SEIN DES GELS PEUT ETRE QUANTIFIEE. LA PLUPART DES PROBLEMES DE LA PRECEDENTE ELECTRODE ETANT IMPUTABLES A SON ORGANISATION EN COUCHES SUCCESSIVES, NOUS CHERCHONS DANS UN DEUXIEME TEMPS A ASSOCIER DE FACON PLUS INTIME GOD ET SOLUTION HYDROPHOBE DU POLYMERE. L'INCLUSION DE L'ENZYME DANS DES GELS DONT LES SOLVANTS SONT DES ALCOOLS D'ASSEZ FAIBLE POIDS MOLECULAIRE, PUIS DANS DES GELS PREALABLEMENT HYDRATES, DONNE DES GELS OU LE POUVOIR CATALYTIQUE DE LA GOD EST CONSERVE. CES MATERIAUX ENZYMATIQUES SONT AISEMENT DEPOSES A LA SURFACE D'ELECTRODES, REALISANT DES DISPOSITIFS DONT LES DIMENSIONS PEUVENT ETRE REDUITES ET DONT LA STRUCTURE PERMET D'EVITER L'INHIBITION DE LA GLUCOSE OXYDASE LORS DU DOSAGE DU GLUCOSE. DEUX STRATEGIES D'IMMOBILISATION DU MEDIATEUR DANS CES CAPTEURS AMPEROMETRIQUES SONT ENVISAGEES, LA PREMIERE EST FONDEE SUR L'AFFINITE DE QUELQUES FERROCENES POUR LE SOLVANT HYDROPHOBE CONSTITUTIF DU GEL, LA SECONDE SUR L'AFFINITE DE L'OXYGENE POUR LES CHAINES PERFLUOREES DU NAFION

Author: Pierre de Macedo Puyau
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Category :
Languages : en
Pages : 319

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LE 2,3-DIPHOSPHOGLYCERATE, EFFECTEUR DE L'AFFINITE DE L'HEMOGLOBINE EN OXYGENE, EST A L'ORIGINE DE TROUBLES MUSCULAIRES ET CARDIO-VASCULAIRES LORSQUE SA CONCENTRATION N'EST PAS CONVENABLEMENT REGULEE. LE TRAVAIL DE RECHERCHE CONSTITUANT CE DOCUMENT A ETE MENE DANS LE BUT DE REGULER LE TAUX DE 2,3-DIPHOSPHOGLYCERATE ERYTHROCITAIRE A TRAVERS L'INHIBITION DE L'ACTIVITE PHOSPHATASE DE L'ENZYME BISPHOSPHOGLYCERATE MUTASE A L'ORIGINE DE LA CONSOMMATION DE CE METABOLITE. APRES UNE MISE AU POINT BIBLIOGRAPHIQUE SUR LES PHOSPHOGLYCERATES MUTASES, LES DIFFERENTES STRATEGIES DE SYNTHESE D'INHIBITEURS SPECIFIQUES SONT ENONCEES, CECI EN VUE D'OBTENIR UNE MEILLEURE CONNAISSANCE DU MECANISME REACTIONNEL, AINSI QUE LA SYNTHESE D'INHIBITEURS DE TYPE IRREVERSIBLE. AINSI SONT DECRITES LES SYNTHESES D'ANALOGUES DES DIFFERENTS SUBSTRATS DIPHOSPHORYLES DES ENZYMES : LE 1,3-DIPHOSPHOGLYCERATE ET LE 2,3-DIPHOSPHOGLYCERATE, AINSI QUE CELLES D'ANALOGUES DU COFACTEUR DE L'ACTIVITE PHOSPHATASE : LE 2-PHOSPHOGLYCOLATE. LES EFFETS DES DIFFERENTS COMPOSES OBTENUS SONT ENSUITE ETUDIES SUR DEUX TYPES DISTINCTS D'ENZYME : LA MONOPHOSPHOGLYCERATE MUTASE DE LEVURE ET LA BISPHOSPHOGLYCERATE MUTASE HUMAINE, PAR DES METHODES DE CINETIQUE ENZYMATIQUE AINSI QUE PAR RADIO MARQUAGE AU #3#3P. LES RESULTATS OBTENUS SONT ENSUITE APPROFONDIS PAR MODELISATION MOLECULAIRE DE L'ENZYME MONOPHOSPHOGLYCERATE MUTASE DE LEVURE EN PRESENCE DES INHIBITEURS DETERMINES. CES DIFFERENTES ETUDES PERMETTRONT DE CONFIRMER AINSI QUE D'AFFINER LES STRATEGIES MISES AU POINT. LES COMPOSES ONT ETE DANS UN DERNIER TEMPS TESTES SUR D'AUTRES ENZYMES DE LA GLYCOLYSE : ALDOLASE, GLYCERALDEHYDE PHOSPHATE DESHYDROGENASE ET PHOSPHOGLYCERATE KINASE, CAR ILS APPARAISSENT COMME ETANT AUSSI DES ANALOGUES DE LEURS SUBSTRATS. CES MOLECULES POURRAIENT ALORS AVOIR UN INTERET THERAPEUTIQUE CONTRE CERTAINS PARASITES (TRYPANOSOMES, LEISHMANIAS) CHEZ QUI LA GLYCOLYSE EST UN METABOLISME ESSENTIEL.