Contribution à l'étude de la fixation et de l'activation par l'hémoglobine en technologie enzymatique PDF Download
Are you looking for read ebook online? Search for your book and save it on your Kindle device, PC, phones or tablets. Download Contribution à l'étude de la fixation et de l'activation par l'hémoglobine en technologie enzymatique PDF full book. Access full book title Contribution à l'étude de la fixation et de l'activation par l'hémoglobine en technologie enzymatique by Didier Guillochon. Download full books in PDF and EPUB format.
Book Description
Cette thèse comprend 9 articles et concerne l'étude de l'hémoglobine immobilisée par coréticulation avec la glutaraldehyde et l'étude de l'activité hydroxylase de l'hémoglobine. L'hémoglobine a été immobilisée par coréticulation avec le glutaraldehyde sous forme de polymères solubles et insolubles. Les effets de la coréticulation par le glutaraldehyde sur les équilibres de fixation de l'oxygène, les potentiels redox, l'auto-oxydation et la stabilité vis-à-vis de la chaleur et de l'urée ont été étudiés. Après immobilisation la fixation coopérative de l'oxygène est abolie, l'affinité pour l'oxygène est augmentée et l'effet Bohr alcalin est incahngé. Les potentiels redox et les effets homotropes sont diminués tandis que l'effet Bohr correspondant reste inchangé. Les vitesses d'auto-oxydation sont augmentées après la coréticulation. La coréticulation stabilise l'hémoglobine vis-à-vis de la dénaturation thermique et par l'urée. Les résultats expérimentaux ont été interprétés en termes de modifications chimiques de la protéine plutôt qu'en termes de " gel " de conformations et par une ouverture de la poche de l'hème vers le solvant. Le facteur limitant pour l'utilisation de l'hémoglobine immobilisée en technologie est l'auto-oxydation du fer. L'hydroxylation de l'aniline a été étudiée avec des systèmes comprenant le NADH, l'acide ascorbique ou l'acide dihydroxyfumarique comme donneurs d'électrons, la riboflavine, la FAD, la FMN ou le bleu de méthylène comme transporteurs d'électrons et l'hémoglobine comme oxydase terminale. Une étude mécanistique montre que de l'eau oxygénée est produite à partir de l'oxygène indépendamment de l'hémoglobine. Du p-aminophénol est ensuite produit par l'activité peroxydase de l'hémoglobine ; le NADH empêche une oxydation de noyaux benzéniques et de désalkylations oxydatives ont été étudiées. L'aniline et le phénol contrairement à l'acétanilide et à la p-toluidine sont hydroxylés par l'hémoglobine. Les hydroxylations se font préférentiellement en para comme pour le cytochrome P-450. des techniques HPLC ont été employées pour le dosage des produits d'hydroxylation.
Book Description
Cette thèse comprend 9 articles et concerne l'étude de l'hémoglobine immobilisée par coréticulation avec la glutaraldehyde et l'étude de l'activité hydroxylase de l'hémoglobine. L'hémoglobine a été immobilisée par coréticulation avec le glutaraldehyde sous forme de polymères solubles et insolubles. Les effets de la coréticulation par le glutaraldehyde sur les équilibres de fixation de l'oxygène, les potentiels redox, l'auto-oxydation et la stabilité vis-à-vis de la chaleur et de l'urée ont été étudiés. Après immobilisation la fixation coopérative de l'oxygène est abolie, l'affinité pour l'oxygène est augmentée et l'effet Bohr alcalin est incahngé. Les potentiels redox et les effets homotropes sont diminués tandis que l'effet Bohr correspondant reste inchangé. Les vitesses d'auto-oxydation sont augmentées après la coréticulation. La coréticulation stabilise l'hémoglobine vis-à-vis de la dénaturation thermique et par l'urée. Les résultats expérimentaux ont été interprétés en termes de modifications chimiques de la protéine plutôt qu'en termes de " gel " de conformations et par une ouverture de la poche de l'hème vers le solvant. Le facteur limitant pour l'utilisation de l'hémoglobine immobilisée en technologie est l'auto-oxydation du fer. L'hydroxylation de l'aniline a été étudiée avec des systèmes comprenant le NADH, l'acide ascorbique ou l'acide dihydroxyfumarique comme donneurs d'électrons, la riboflavine, la FAD, la FMN ou le bleu de méthylène comme transporteurs d'électrons et l'hémoglobine comme oxydase terminale. Une étude mécanistique montre que de l'eau oxygénée est produite à partir de l'oxygène indépendamment de l'hémoglobine. Du p-aminophénol est ensuite produit par l'activité peroxydase de l'hémoglobine ; le NADH empêche une oxydation de noyaux benzéniques et de désalkylations oxydatives ont été étudiées. L'aniline et le phénol contrairement à l'acétanilide et à la p-toluidine sont hydroxylés par l'hémoglobine. Les hydroxylations se font préférentiellement en para comme pour le cytochrome P-450. des techniques HPLC ont été employées pour le dosage des produits d'hydroxylation.
Book Description
L'ETUDE DE PLUSIEURS FRACTIONS MINEURES DE L'HEMOGLOBINE HUMAINE NOUS A PERMIS DE METTRE EN EVIDENCE PLUSIEURS MODIFICATIONS. CES MODIFICATIONS SONT DE TYPE NON ENZYMATIQUE ET SIMILAIRE A CELUI DECRIT POUR L'HEMOGLOBINE A1C (FIXATION SUR NH2 TERMINAL DE LA CHAINE BETA D'UNE MOLECULE DE GLUCOSE). DANS CETTE THESE, NOUS AVONS PU METTRE EN EVIDENCE UN CERTAIN NOMBRE DE RESIDUS SE FIXANT SUR LES NH2 TERMINAUX DES CHAINES BETA ET ALPHA ET DES EPSILONS NH2 DES LYSINES BETA 82 (LACTATE, PYRUVATE, ACETATE, FORMIATE, CARBAMATE, 2-3 DIPHOSPHOGLYCERATE, GLYCERATE). L'IDENTIFICATION DE CES RESIDUS N'A ETE RENDUE POSSIBLE QUE PAR L'UTILISATION EN ETROITE ASSOCIATION DE LA CLHP ET DE LA SPECTROMETRIE DE MASSE (FAB, API)
Book Description
DEUX ASPECTS DE L'ETUDE CONTEMPORAINE DE L'HEMOGLOBINE ONT ETE ABORDES: 1) NOUS AVONS MIS AU POINT UNE METHODE D'IDENTIFICATION RAPIDE ET PRECISE DES DIFFERENTS VARIANTS DEJA DECRITS DE L'HEMOGLOBINE PAR DES TECHNIQUES D'ELECTROPHORESES ET DE CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE A HAUTE PERFORMANCE. NOUS AVONS PU METTRE EN EVIDENCE UN COMPORTEMENT ELECTROPHORETIQUE UNIQUE POUR 92% DES 206 VARIANTS TESTES. 2) NOUS AVONS CHERCHE A MINIATURISER LES TECHNIQUES D'ETUDE DE LA STRUCTURE PRIMAIRE DES PROTEINES, L'HEMOBLOGINE ETANT ALORS CONSIDEREE COMME PROTEINE MODELE. L'UTILISATION DE LA CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE A HAUTE PERFORMANCE, D'UN MICROSEQUENCEUR PROTEIQUE AUTOMATIQUE ET DE LA SPECTROMETRIE DE MASSE ONT ETE DES EVENEMENTS CLEFS DE L'EVOLUTION DES TECHNIQUES. LES QUANTITES DE MATERIEL NECESSAIRE ET LES DELAIS D'OBTENTION D'UN RESULTAT PAR CES TECHNIQUES UTILISEES ISOLEMENT OU EN ASSOCIATION EN FONT DES OUTILS D'ANALYSE TOUT A FAIRE COMPETITIFS EN REGARD DES TECHNIQUES DE BIOLOGIE MOLECULAIRE
Author: Ahmed Mokrane Publisher: ISBN: Category : Languages : fr Pages : 123
Book Description
L'objectif de ce travail est l'étude du chemin réactionnel de l'activation du récepteur d'un enzyme par ce dernier dans le cadre de la méthode hybride mécanique quantique/mécanique moléculaire LCSF (Local Self Consistent Field). Pour ce faire, nous avons apporté une amélioration méthodologique au logiciel GEOMOP (logiciel basé sur le formalisme LSCF), permettant de traiter les interactions à longue distance en gagnant un temps de calcul considérable (accélération d'un facteur moyen de 3), au prix d'une perte de précision infime. Nous avons aussi introduit une méthodologie permettant une étude de l'influence de la polarisation de l'environnement protéique sur la stabilité des intermédiaires de la réaction. En effet, le champ de réaction dû au continuum qui représente la contribution de la polarisation du milieu (environnement protéique) dans les interactions entre partie quantique et classique, stabilise les intermédiaires réactionnels de quelques kcal/mol. L'application au complexe thrombine/récepteur de la thrombine nous a permis de comprendre la base pour étudier des molécules pharmacologiques actives qui pourraient soit bloquer le récepteur, soit bloquer la thrombine.
Book Description
L'HEMOGLOBINE PRESENTE DES POTENTIALITES EN GENIE BIOLOGIQUE DANS LES DOMAINES DU TRANSPORT ET DE L'ACTIVATION DE L'OXYGENE (SUBSTITUT DANS LE SANG ACTIVITES HYDROXYLASES). LES PRINCIPAUX PROBLEMES RENCONTRES SONT LA STABILITE DE L'OXYHEMOGLOBINE DANS LE PREMIER CAS ET LES NOMBREUSES REACTIONS SECONDAIRES SURVENANT DANS LE SECOND CAS AVEC DES SYSTEMES TELS QUE LE SYSTEME REDUCTEUR CHIMIQUE-HEMOGLOBINE-EAU OXYGENE QUI PRESENTE UN GRAND INTERET EN TECHNOLOGIE ENZYMATIQUE. LES MECANISMES REACTIONNELS DES REDUCTEURS CHIMIQUES, L'ACIDE ASCORBIQUE (ASC) ET L'ACIDE DIHYDROXYFUMARIQUE (DHF), ONT ETE ETUDIES AFIN DE STABILISER L'OXYHEMOGLOBINE VIS-A-VIS DE SON AUTO-OXYDATION ET DE MIEUX COMPRENDRE LEUR ROLE DANS LES HYDROXYLATIONS OBTENUES AU COURS DE L'ACTIVITE PEROXYDASE DE L'HEMOGLOBINE. LES RECHERCHES SE SONT ORGANISEES EN TROIS VOLETS: L'ETUDE DE LA GENERATION D'ESPECES ACTIVEES DE L'OXYGENE PAR DES SOLUTIONS D'ASC ET DE DHF AFIN DE MIEUX MAITRISER LEUR MISE EN UVRE: L'ETUDE DE LA STABILISATION DE L'HEMOGLOBINE PAR CES REDUCTEURS ET ENFIN L'ETUDE DE LEUR MECANISME D'ACTION AU NIVEAU DE L'ACTIVITE HYDROXYLASE DE L'HEMOGLOBINE. LES PRINCIPAUX RESULTATS OBTENUS: L'AUTO-OXYDATION DE L'OXYHEMOGLOBINE PEUT ETRE LIMITEE EN PRESENCE D'ASC ET DE LA CATALASE AVEC DES TAMPONS DEMETALLES ET UN CHELATEUR DE METAUX TEL QUE LE DTPA. DE TELS SYSTEMES PEUVENT AUGMENTER LA DEMI-VIE DE L'OXYHEMOGLOBINE DE 7,5 A 24 JOURS, A TEMPERATURE AMBIANTE. TOUTEFOIS LE DHF A UN EFFET OPPOSE A CELUI DE L'ASC VIS-A-VIS DE LA STABILITE DE L'OXYHEMOGLOBINE: L'HEMOGLOBINE ACTIVE L'EAU OXYGENEE EN ESPECES PLUS ACTIVES QUI HYDROXYLENT L'ANILINE, EN PRESENCE DE REDUCTEURS CHIMIQUES TELS QUE L'ASC OU LE DHF, SELON UN MECANISME REACTIONNEL ANALOGUE A CELUI DU CYTOCHROME P450 (ACTIVITE HYDROXYLASE HYDROPEROXYDE DEPENDANTE). LE ROLE DES REDUCTEURS CHIMIQUES SERAIT A LA FOIS D'EMPECHER LA FIXATION DU PRODUIT D'HYDROXYLATION SUR LA GLOBINE AINSI QUE LA DENATURATION DE LA PROTEINE PAR REDUCTION DES RADICAUX PROTEIQUES APPARAISSANT AU COURS DES CYCLES DES REACTIONS AVEC L'EAU OXYGENEE
Author: Didier Guillochon
Author: Didier Guillochon
Author: Yves Blouquit
Author: Claire Ambid Lacombe
Author: Gérard Gacon
Author: 
Author: GENEVIEVE.. COUSIN
Author: Ahmed Mokrane
Author: Hélène Colson-Guastalla
Author: MOHAMED.. FARAH
Author: Beaulac, Pauline